BAD慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

• 作者: 何彦琪 朱静 李为民 黄娜
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: BAD A549 慢病毒 稳定细胞株
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 363-366
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨促凋亡基因BAD(Bcl-2-associated death protein)重组慢病毒表达载体构建及其对肺癌A549细胞株增殖的影响.方法 应用PCR法从含有目的基因的质粒pAV MCMV-BAD-GFP中扩增BAD基因片段,克隆至慢病毒载体(pLVX-IRES-ZsGreen 1),应用PCR、酶切和测序鉴定正确后,经病毒包装,感染A549细胞,经流式细胞仪筛选稳定表达细胞株,Western blot鉴定重组慢病毒感染的A549细胞BAD的表达.采用CCK-8试剂盒定点检测细胞的光密度(OD)值,分析BAD蛋白过表达对A549细胞增殖能力的影响.结果 酶切鉴定和基因测序证实长度为507 bp的BAD基因成功克隆至慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1;重组慢病毒通过感染A549细胞株和流式细胞仪筛选出单克隆细胞株BAD-A549,Western blot检测结果显示,细胞培养BAD-A549细胞可稳定过表达BAD蛋白.体外增殖结果显示,细胞培养120～144 h,BAD组的OD值均较对照组低(P＜0.05).结论 成功构建了BAD重组慢病毒载体,获得稳定表达BAD的A549细胞株.BAD过表达能有效抑制A549细胞的增殖速度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李为民	四川大学华西医院呼吸内科	186	1195	17.0	27.0
2	何彦琪	四川大学华西医院呼吸内科	4	21	2.0	4.0
3	黄娜	成都医学院第一附属医院呼吸内科	17	130	4.0	11.0
7	朱静	绵阳中心医院呼吸内科	1	1	1.0	1.0