β-catenin siRNA慢病毒载体的构建及其对A549耐药细胞生长及自噬的影响

• 作者: 丁明 刘超 宋萍 朱黎容 葛莉萍 蒋婷 连小怡 郑金旭
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肺癌 Wnt信号通路 耐药 自噬
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 213-218
• 页数: 6页
• 分类号: R734.2
• 字数: 4870字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y160246

摘要

目的:通过构建β-catenin siRNA慢病毒表达载体,研究Wnt信号通路与顺铂诱导非小细胞肺癌耐药的相关机制.方法:根据β-catenin基因mRNA序列,设计并合成3对shRNA序列,退火形成双链DNA,与慢病毒载体 pLentiLox3.7连接、转化,挑取阳性克隆进行测序鉴定;转染293T 细胞,包装产生慢病毒,检测滴度;感染A549细胞,筛选出有效抑制靶点;将慢病毒感染A549/DDP耐药细胞株24 h后,用不同浓度的顺铂干预48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;根据细胞预先有无慢病毒感染,分为A549组、A549/DDP组、A549/DDP+siRNA组、A549/DDP+siNC组,用8 μg/mL顺铂处理各组细胞,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法测定各组细胞中自噬相关蛋白 LC3Ⅱ及Wnt信号通路关键因子β-catenin表达水平.结果:经DNA测序鉴定,成功构建β-catenin siRNA慢病毒载体,并筛选出有效抑制靶点;相同浓度下顺铂对A549细胞抑制作用明显大于A549/DDP细胞(P<0.05),对A549/DDP+siRNA组细胞的抑制作用也强于A549/DDP细胞;8 μg/mL顺铂干预后,A549/DDP组β-catenin及LC3Ⅱ的表达明显高于A549组(P<0.05),而A549/DDP+ siRNA组β-catenin和LC3Ⅱ表达较A549/DDP组减少.结论:Wnt信号通路参与非小细胞肺癌对顺铂产生的耐药,该过程与细胞产生自噬有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑金旭	江苏大学附属医院呼吸内科	86	437	10.0	16.0
2	蒋婷	江苏大学附属医院呼吸内科	6	95	3.0	6.0
3	宋萍	江苏大学附属医院呼吸内科	20	82	6.0	7.0
4	刘超	江苏大学附属医院呼吸内科	35	80	5.0	6.0
5	连小怡	江苏大学附属医院呼吸内科	2	5	2.0	2.0
6	葛莉萍	江苏大学附属医院呼吸内科	3	17	3.0	3.0
7	朱黎容	江苏大学附属医院呼吸内科	4	19	3.0	4.0