核糖体蛋白S6 shRNA慢病毒载体的构建及其对肺腺癌A549细胞株增殖的影响

• 作者: 刘丹 张雯 李为民 陈勃江
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 核糖体蛋白S6 短发夹RNA 肺腺癌 增殖
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 肺癌分子病理与临床诊疗进展
• 页码范围: 293-298
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨靶向抑制核糖体蛋白S6(rpS6)表达的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体的构建方法及抑制rpS6表达对肺腺癌A549细胞株增殖的影响.方法 合成针对rpS6基因的双链寡核苷酸序列,插入质粒载体pGCsil-GFP,转化大肠杆菌细胞,测序鉴定插入片段;再通过293T细胞转染和慢病毒包装,收集浓缩病毒并感染肺腺癌A549细胞株.流式细胞技术分选强阳性表达绿色荧光蛋白(GFP)的细胞克隆,荧光定量PCR及Western blot检测rpS6基因的mRNA和蛋白干扰效率.体外利用CCK-8试剂盒定点检测细胞的光密度(OD)值,分析抑制rpS6表达对肺腺癌A549细胞株增殖能力的影响.结果 重组pGCsil-sh-r pS6-GFP质粒经测序鉴定示:插入序列与rpS6干扰序列完全符合,证实pGCsil-sh-rpS6-GFP质粒构建成功.sh-rpS6慢病毒稳定感染A549细胞株后,流式细胞技术分选GFP强阳性表达的细胞克隆比率为86.80％.荧光定量PCR与Westernblot检测示:sh-rpS6组的mRNA和蛋白干扰效率分别为(79.72±6.83)％、(83.77±12.13)％.体外增殖实验示:与A549细胞相比,sh-rpS6组在各时间点的OD值较对照组均下降(均P＜0.05).结论 构建的sh-rpS6慢病毒载体能稳定、有效地抑制肺腺癌A549细胞株rpS6的表达,并有效减慢A549细胞株的增殖速度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈勃江	四川大学华西医院呼吸内科	52	355	9.0	16.0
2	李为民	四川大学华西医院呼吸内科	186	1195	17.0	27.0
3	刘丹	四川大学华西医院呼吸内科	116	499	13.0	17.0
4	张雯	四川大学华西医院呼吸内科	18	324	8.0	18.0