小鼠肝炎病毒逆转录环介导等温扩增检测技术的建立

• 作者: 刘忠华 刘香梅 张钰 袁文 黄韧
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小鼠肝炎病毒 逆转录环介导等温扩增 逆转录聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 354-359,插7-插8
• 页数: 8页
• 分类号: S865.1+3|S855.3
• 字数: 3765字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2009.05.008

摘要

目的 建立小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术并进行初步应用.方法 针对MHV核衣壳蛋白基因序列设计6条特异性引物,以MHV基因组RNA为模板,进行RT-LAMP反应.扩增产物通过浊度、SYBR green I荧光染料显色及电泳三种方法观察结果.同时,用限制性内切酶Alu Ⅰ对扩增产物进行酶切鉴定.进行RT-LAMP特异性和敏感性试验.最后用建立的RT-LAMP方法检测55份小鼠临床样本.结果 RT-LAMP技术简单快速,等温条件下(65℃)一个小时内即可完成反应.酶切结果证明RT-LAMP产物正确.该技术具有很高的特异性和敏感性,可检测到的MHV RNA最低浓度为0.1 pg/μL,比逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)灵敏10倍.临床样本检测结果显示,与RT-PCR比较RT-LAMP方法的敏感性和特异性分别为100%和83.3%.结论 RT-LAMP技术是一种快速、简便诊断方法,该方法检测特异性强、敏感性高,可以成为快速准确检测MHV的有效手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁文	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	18	142	6.0	11.0
2	刘忠华	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	40	316	10.0	15.0
3	黄韧	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	168	1009	16.0	22.0
4	张钰	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	42	240	7.0	13.0
5	刘香梅	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	26	114	6.0	8.0