应用逆转录-环介导等温扩增技术检测乙型肝炎病毒RNA方法的建立

• 作者: 吴丹丹 孙殿兴 张超群 李东 马士朝
• 来源期刊: 解放军医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 逆转录-环介导等温扩增技术 HBV-RNA HBV-DNA
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 影像与检验
• 页码范围: 107-112
• 页数: 6页
• 分类号: R512.62
• 字数: 4212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-140X.2019.01.027

摘要

目的 建立逆转录-环介导等温扩增(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法 检测乙型肝炎病毒(HBV)RNA,为乙型肝炎抗病毒治疗安全停药的研究提供技术支持.方法从NCBI数据库下载HBV A～D型,通过序列对比选出S区保守序列设计LAMP引物;提取HBV血清样本RNA与DNA,用RT-LAMP、LAMP进行检测;通过对非特异模板扩增实验验证扩增特异性;通过倍比稀释的HBV-RNA模板,用RT-PCR法与RT-LAMP法检测以评价灵敏性.结果 经过特异性实验证明LAMP特异性高,未检测到非特异性扩增.RT-LAMP的灵敏性为5×103 IU/ml,RT-PCR的灵敏性为5×101 IU/ml.用RT-LAMP与LAMP检测RNA与DNA证明了HBV-DNA检测不到后,HBV-RNA仍存在.结论 本研究针对HBV S区保守序列,设计了针对我国主要的4种HBV基因型(A、B、C、D)LAMP通用引物,从而建立了检测HBV-RNA的RT-LAMP新技术,有助于为应用核苷类似物的乙型肝炎患者安全停药标志物的研究提供技术支持.