Stathmin siRNA表达载体的构建及对LM8细胞生物学行为的影响

• 作者: 刘勇 杨述华 车彪 邵增务
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: stathmin RNA干扰 骨肉瘤 培养的肿瘤细胞 移植瘤 小鼠
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-11
• 页数: 6页
• 分类号: R73-34
• 字数: 4902字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3639.2009.01.002

摘要

背景与目的:Stathmin在多种恶性肿瘤细胞中都有高水平表达,通过抑制其表达可以干扰恶性肿瘤细胞的分裂,影响肿瘤细胞的增殖与凋亡.本研究构建并观察stathmin基因RNA干扰表达载体转染LM8细胞系后对stathmin表达及细胞生物学行为的影响.方法:构建靶向stathmin干扰质粒pGenesil-1-Stathmin和通用对照质粒pGenesil-1-HK,以脂质体法将2个重组质粒分别转染骨肉瘤LM8细胞系.实时荧光定量PCR和Western印迹技术检测各组LM8细胞系stathmin在mRNA和蛋白水平的表达,MTT(噻唑蓝)法比色分析检测细胞体外生长抑制率,软琼脂集落形成实验观察单个细胞体外增殖活力,细胞HE染色观察细胞形态学的变化,Hoechst染色观察细胞凋亡特征并计算凋亡率,流式细胞术定量分析细胞周期变化,C3H小鼠移植瘤实验显示肿瘤细胞成瘤能力.结果:DNA测序证实成功构建pGenesil-1-Stathmin重组质粒.转染LM8细胞后,明显抑制stathmin基因表达;细胞体外生长抑制率显著增加;单个细胞体外增殖活力显著下降;细胞HE染色部分细胞呈典型的凋亡细胞形态学改变;Hoechst染色显示细胞凋亡特征,细胞凋亡率明显高于对照组;流式细胞术检测显示细胞周期阻滞于G2/M期,明显高于对照组:C3Hdx鼠移植瘤实验显示特异转染组致瘤率下降,肿瘤生长减缓. 结论:成功构建的靶向干扰质粒pGenesil-1-Stathmin能有效抑制stathmin基因在骨肉瘤LM8细胞的表达并影响其相关生物学行为,其抑制骨肉瘤细胞的增殖与生长,为stathmin基因应用于骨肉瘤的基因治疗研究奠定了理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨述华	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	562	4404	28.0	40.0
2	刘勇	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	158	1356	20.0	28.0
3	车彪	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	8	98	5.0	8.0
4	邵增务	华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科	193	1257	19.0	25.0