不同水解温度、时间对细胞核产物与DNA含量检测的影响

• 作者: 夏潮涌 杨杰 焦红丽 贺国洋
• 来源期刊: 中国体视学与图像分析
• 学科: 医学
• 关键词: HCL水解 OD值 DNA舍量 肝细胞涂片、滴片
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 423-428
• 页数: 6页
• 分类号: R363.1
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨水解产物变化趋势与染色效果的相关性以及两种不同染色方法达到最佳染色效果的水解时间,为科研和临床的应用提供有价值的参考.方法 选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织,一部分制成恒定细胞数的肝细胞滴片,5N HCL水解后,紫外分光光度计扫描产物的最大吸收峰波长,并检测该产物OD值的变化;另一部分肝组织制成肝细胞涂片,分别在室温和60℃温度下水解不同时间,应用改良和快速两种Feulgen法染色,图像分析仪检测和分析单个细胞核的DNA含量与倍体.结果 (1)肝细胞滴片水解产物扫描在260 nm处有最大吸收波峰;(2)紫外分光光度计在室温和60℃水解温度下测得水解产物的量随着时间的延长逐渐增加;(3)同一大鼠在相同水解温度下,经过不同时间水解,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异:60℃水解温度下,IOD(5～7 min)>IOD(9～15 min)>IOD(1 min,20 min),室温水解温度下,IOD(50 min)>IOD(20～30 min,70～90 min)>IOD(5～10min,100 min).结论 HCL对细胞核的水解作用使DNA双链中糖苷键断裂,醛基暴露,碱基脱至HCL中,且量逐渐增加;HCL水解时间与染色的效果不成正比,两种Feulgen染色法存在各自较佳染色效果的时间段,分别为:快速法5～7 min,改良法20～90 min.