胎儿肝干细胞的分离、鉴定及培养

• 作者: 张晔 张金卷 朱争艳 李涛 杜智 杨斌 高英堂
• 来源期刊: 继续医学教育
• 学科: 医学
• 关键词: 肝干细胞 细胞分离 细胞鉴定 免疫细胞化学
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: CME临床实践
• 页码范围: 36-39
• 页数: 4页
• 分类号: R321.5
• 字数: 3089字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-6763.2009.04.012

摘要

目的:分离、鉴定人胎肝中肝干细胞并短期培养,为体外扩增及诱导分化实验提供细胞来源.方法:采用原位两步胶原酶灌注结合Percoll液密度梯度离心的方法分离、纯化胎肝中肝干细胞,用光镜、电镜观察所得细胞形态,通过免疫细胞化学染色检测细胞AFP、CK19、CD34.测量肝脏重量及获得的肝千细胞数量,计算肝干细胞产量,对肝干细胞进行短期培养.结果:两步胶原酶灌注可有效消化胎儿肝脏结缔组织,分离的肝脏细胞经不连续Percoll密度梯度离心,可得到肝干细胞,细胞活性率为(88.35±2.45)%(n=30).光镜下肝干细胞呈卵圆形,直径约为成熟肝细胞的1/3,电镜下肝干细胞直径约10μm,细胞大部分被卵圆形细胞核所占据,细胞质少,核浆比例大,内质网、线粒体、高尔基体等细胞器不发达.ABC法免疫细胞化学染色显示:胎儿肝干细胞CK19、CD34及AFP呈阳性信号.对肝干细胞进行培养,12 h后肝干细胞逐渐粘附、贴壁、铺展,呈现为圆形、椭圆形,呈上皮细胞样平铺生长.肝干细胞产量为(8.76±0.46)×105个/g(n=15).结论:两步胶原酶灌注结合不连续Percoll液密度梯度离心法可较好地分离纯化胎儿肝干细胞,所得细胞可体外培养,可做为进一步实验的材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜智	天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室	134	751	13.0	20.0
2	朱争艳	天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室	49	200	8.0	10.0
3	高英堂	天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室	56	319	8.0	15.0
4	杨斌	天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室	5	11	2.0	3.0
5	张金卷	天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室	30	75	5.0	7.0
6	李涛	天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室	18	103	6.0	9.0
7	张晔	天津市第三中心医院天津市人工细胞重点实验室	6	54	4.0	6.0