人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCRγδ抗体扩增及其培养和保存的条件

• 作者: 何维 刘庆丰 周建华 崔瑛 崔莲仙 巴德年 康宁
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: γδT细胞 可溶性抗体 培养液 稳定性
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 106-112
• 页数: 7页
• 分类号: R392.11|R392-33
• 字数: 4353字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2009.02.002

摘要

目的:比较人外周血γδ T细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件.方法:分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性anti-TCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI 1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδ T细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδ T细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶(lacate dehydrogenase,LDH)法检测γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用.结果:添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI 1640培养液对γδ T细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液.可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδ T细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδ T细胞受体(T cell receptor,TCR)库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性.这些γδ T细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4 ℃条件下保存12 h,细胞存活率仍达95%以上.结论:可溶性anti-TCR γδ抗体和含有人AB血浆的RPMI 1640培养液可以用于人外周血γδ T细胞的体外扩增,扩增得到的γδ T细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好.