奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的原核表达及其活性检测

• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 奶牛 GM-CSF 克隆 表达 活性检测
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 免疫学
• 页码范围: 808-812
• 页数: 5页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4274字
• 语种: 中文

摘要

为了表达奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)并对其活性进行检测.根据GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列(U22385),设计一对特异性引物;采用RT-PCR方法,以LPS体外诱导的奶牛肺泡巨噬细胞为材料,从总RNA中扩增出奶牛GM-CSF cDNA基因,克隆到pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定,结果显示克隆的奶牛GM-CSF基因与GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.7%和99.3%.构建pET32a-GM-CSF原核表达重组质粒,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示重组蛋白大小约为35 ku.分别运用集落形成试验与MTT比色法测定重组蛋白活性,结果显示重组奶牛GM-CSF蛋白能够诱导粒细胞前体呈集落性生长并具有较强的体外增殖淋巴细胞的活性,为下一步临床试验奠定了基础.