小鼠高迁移率族蛋白1cDNA克隆、原核表达与鉴定

• 作者: 何志强 周成林 夏圣 戴晓丽 王胜军 石燕 苏兆亮 薛渊 许化溪 邵启祥 陈建国 黄新祥
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 高迁移率族蛋白 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 检验医学
• 页码范围: 230-232
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2309字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2009.03.010

摘要

目的:克隆并原核表达小鼠高迁移率族蛋白1(high mobility group box1,HMGB1).方法:从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,应用RT-PCR获得小鼠HMGB1cDNA,经PCR扩增小鼠HMGB1基因;通过T-A克隆将该基因构建到PMD-18T载体中,测序鉴定;将该基因插入pET-28a(+)表达载体,IPTG诱导后,可表达相对分子质量约30 kDa的蛋白.蛋白质印迹鉴定表达的目的蛋白.结果:经RT-PCR扩增得到648 bp的DNA片段,序列分析显示与基因库中报道的已知序列完全一致;构建了含有HMGB1编码序列的原核表达载体,经诱导表达、蛋白质印迹鉴定,获得相对分子质量约30 kDa的融合蛋白.结论:成功克隆和表达了小鼠HMGB1基因,为HMGB1蛋白的功能试验奠定了基础.