靶向线粒体转录因子A大鼠活体RNA干扰实验动物模型的建立

• 作者: 冯春林 别平 吴乔 唐春 张玉君 林恒
• 来源期刊: 中国现代普通外科进展
• 学科: 医学
• 关键词: 靶向线粒体转录因子A RNA干扰 慢病毒载体 模型 动物 大鼠 Wistar
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 743-748
• 页数: 6页
• 分类号: R657.3
• 字数: 5314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9905.2009.09.003

摘要

目的:在体外构建并筛选出靶向线粒体转录因子A(TFAM)的有效RNA干扰慢病毒载体,用于大鼠整体RNAi实验,观察其对肝组织中目的基因表达的干扰效果.方法:设计4条siRNA序列并合成双链DNAoligo,制备目的基因RNA干扰慢病毒载体,体外感染目的细胞,利用RT-PCR和Western blot的方法检测目的基因TFAM的表达情况,从而筛选出有效的干扰靶点.构建大鼠活体RNAi动物模型,观察大鼠肝脏中靶基因表达的变化情况.结果:酶切鉴定及测序结果均提示siRNA序列成功连接入载体中.RT-PCR结果提示3号靶点的干扰效率最高,达到了55%左右,Western blot也验证了其干扰的有效性.大鼠活体RNAi结果显示,肝脏中目的基因的表达也明显减少,这种表达减弱具有特异性和靶向性.结论:TFAM靶向RNA干扰慢病毒载体构建成功,能有效抑制目的细胞中线粒体转录因子A的表达.构建的慢病毒载体在大鼠活体内也具有良好的干扰效果.该研究为下一步利用此慢病毒载体进行活体RNA干扰打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐春	第三军医大学西南医院肝胆外科研究所	30	198	9.0	12.0
2	张玉君	第三军医大学西南医院肝胆外科研究所	37	148	6.0	10.0
3	别平	第三军医大学西南医院肝胆外科研究所	140	693	13.0	18.0
4	林恒	第三军医大学西南医院肝胆外科研究所	9	36	3.0	5.0
5	冯春林	第三军医大学西南医院肝胆外科研究所	5	18	2.0	4.0
6	吴乔	第三军医大学西南医院肝胆外科研究所	6	48	2.0	6.0