Exendin-4的表达及其降糖活性研究

• 作者: 张贵星 王小纯 祖向阳 陈小让
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: Exendin-4 基因改造 表达 血糖浓度
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 316-320
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

根据Gene Bank中登录的Exendin-4的氨基酸序列(AAB2006),结合大肠杆菌的密码子偏嗜性,对原有基因70%的密码子进行改造,使其在大肠杆菌中高效表达;同时添加KpnI和NcoI酶切位点和肠激酶识别位点,构建成重组表达载体pET-32a(+)-Exendin-4,转化大肠杆菌BL21(DE3).在30℃条件下1 mmol/L的IPTG诱导表达6 h,融合蛋白表达量占细菌蛋白总量的32%.利用亲和层析纯化融合蛋白,每克湿菌体可获得纯度98%的融合蛋白6.44mg.利用肠激酶切除融合蛋白的N端融合部分,用亲和层析吸附N端融合肽,每克湿菌体可获得纯度99%的Exendin-4 1.59 mg.腹腔注射糖尿病基因小鼠(BKS.Cg-m+/+Lepr db/J鼠),血糖浓度下降极显著,最佳用量为7μg/kg,注射后4 h血糖降低达51.93%.