免疫磁珠分离与实时定量PCR技术联合检测水中轮状病毒的研究

• 作者: 何苗 刘丽 施汉昌 李丹 杨万
• 来源期刊: 环境科学
• 学科: 地球科学
• 关键词: 免疫磁珠分离前处理 实时定量PCR 轮状病毒 环境水样
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 页码范围: 1368-1375
• 页数: 8页
• 分类号: X832
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0250-3301.2009.05.019

摘要

建立了一种免疫磁珠分离技术联合实时定量PCR快速定量检测水中轮状病毒的方法.通过制备能够分离水中轮状病毒的特异免疫磁珠,优化分离条件,建立了免疫磁珠分离前处理方法,并与逆转录、实时定量PCR结合,成功用于水中轮状病毒的检测.研究发现,在1 mL水样中加入10 μL轮状病毒免疫磁珠、0.25 μL Tween 20、孵育2 h可达到较好的分离效果;免疫磁珠可用于3%牛肉浸膏等常用病毒洗脱液中的轮状病毒的分离,表明该分离技术能与已有的病毒浓集方法良好地整合.免疫磁珠分离技术与实时定量PCR联合用于检测水中轮状病毒,全过程需时约5 h,检测限为1×104 copies/mL(相当于3～4 PFU/mL),检测结果与细胞病变试验检测结果有良好的线性相关关系(R2=0.981·!6),表明其能较好地表征水样的病毒感染风险.对接种已知量的轮状病毒的污水处理厂二级出水、再生水、地表水、自来水等水样的实验表明,该法可用于各种水样中轮状病毒的检测.