苏云金芽孢杆菌vip3A基因的鉴定、克隆及活性分析

• 作者: 侯名语 申建茹 郭巍
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 营养期杀虫蛋白vip3Aa基因 克隆 表达 杀虫活性
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 110-116
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2009.01.019

摘要

[目的]鉴定我国自行分离的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株中vip3A基因的分布和基因型,从其中对鳞翅目幼虫表现高毒力的Bt菌株中克隆vip3Aa基因.[方法]利用PCR-RFLP方法确定vip3A基因的分布和鉴定基因型,利用PCR方法克隆vip3A全长基因.[结果]171株野生型Bt菌株中共鉴定出63株含有vip3A基因,均与vip3Aa1类基因相似.从TF9和Bt16菌株中克隆得到2个vip3Aa基因,分别构建了携带vip3Aa基因的表达载体p30vip-26和p30vip-27,SDS-PAGE和Western Blot分析表明,IPTG诱导后均可表达88 kDa左右的Vip3A蛋白,蛋白可溶性分析表明约10%可溶.这两种基因序列已被国际Bt基因命名委员会分别正式命名为vip3Aa26和vip3Aa27.生物测定结果显示,Vip3Aa27蛋白对粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)3种重要鳞翅目害虫初孵幼虫的毒力较高,LC50值分别为0.125 μg/mL,0.238 μg/mL和9.238 μg/mL.而Vip3Aa26蛋白仅对粉纹夜蛾有活性,LC50值为4.423 μg/mL.[结论]本研究中的Vip3Aa27蛋白对粉纹夜蛾、甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫均能表现高杀虫活性,而Vip3Aa26蛋白仅对粉纹夜蛾幼虫有活性,实验结果表明Vip3A蛋白个别氨基酸的变化对其杀虫活性影响很大.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭巍	河北农业大学植物保护学院河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心	30	143	7.0	10.0
5	侯名语	河北农业大学生命科学学院	12	58	4.0	7.0
6	申建茹	河北农业大学植物保护学院河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心	3	15	3.0	3.0