人OX40融合蛋白的表达及其纯化

• 作者: 冯永堂 冷雪娇 王成伟 苗乃法 辛宁 鞠吉雨
• 来源期刊: 潍坊医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: OX40融合蛋白 表达 纯化 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 分子免疫学
• 页码范围: 21-23,12
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3233字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3101.2009.01.008

摘要

目的 表达含有人OX40胞外段的融合蛋白,纯化目的 蛋白,为下一步制备抗人OX40单克隆抗体及鉴定打下良好的基础.方法 采用冰冷热击法将测序正确的pET32a-OX40胞外段的重组质粒转入表达菌株BL21(DE3)的感受态细胞,接种于含氨苄青霉素的培养基筛选出阳性克隆.将阳性克隆细菌用IPTG诱导培养,收集不同时间的培养产物,离心分离菌体,取菌体超声破菌,离心收集胞质上清和包涵体沉淀,进行SDS-PAGE分析,观察不同时间条件对目的 蛋白表达的影响及目的 蛋白分布情况,筛选优化表达条件.采用Ni离子亲合层析柱纯化目的 蛋白,然后使用超滤管对蛋白进行脱盐处理,并用核酸蛋白检测仪测定目的 蛋白的浓度.结果 筛选到表达pET32a-OX40的阳性菌株.SDS-PAGE电泳表明,含有重组质粒的表达菌株经IPTG诱导后,在蛋白Marker的31.0～42.7kD之间出现了新的融合蛋白带,在胞质和包涵体中均有目的 融合蛋白的表达.优化表达条件分析表明,在诱导的不同时间内新蛋白的表达量没有明显差别.用Ni离子亲和层析柱纯化的蛋白经超滤管进行脱盐处理后,获得的目的 蛋白含量为56.266g/L.结论 成功获得表达pET32a-OX40的阳性菌株;表达产物经Ni离子亲和层析柱层析处理可获得纯度较高的目的 蛋白.