含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌株的构建与鉴定

• 作者: 仉元亭 任大明 叶建新 张学光 陈卫昌
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 4-1BBL基因 减毒沙门氏菌 DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 336-339,345
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4283字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌.方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PCR鉴定,SL3261疫苗菌与HepG2细胞体外共培养,荧光显微镜和RT-PCR分别检测GFP(绿荧光蛋白)的表达和4-1BBL基因的转录.结果:导入pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261经抽提质粒电泳后获得了同原转化质粒相同大小的目的条带,质粒PCR获得了约930 bp的条带,200个HepG2细胞感染SL3261为201±46 CFU、SL3261-pIRES2-EGFP为163±37,而SL3261-pIRES2-EGFP-4-1BBL为158±32,含质粒SL3261在体外感染HepG2细胞的能力同原细菌基本相同(P＞0.05).感染含质粒SL3261的HepG2细胞观察到GFP表达,感染含重组质粒SL3261的HepG2细胞经RT-PCR检测到约930 bp的目的条带.结论:成功构建了能携带大鼠4-1BBL基因真核表达质粒的SL3261疫苗菌.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学光	苏州大学生物技术研究所	399	1957	18.0	24.0
2	任大明	复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	98	819	15.0	24.0