高迁移率族蛋白HMGB2的细胞内定位及移位研究

• 作者: 伍丽琼 刘铮 姜勇 张秀娟 徐佳 王娟 邓鹏
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 高迁移率族蛋白质类 血凝素类 遗传载体
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 434-436,444
• 页数: 4页
• 分类号: R341
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.04.018

摘要

目的 观察鼠高迁移率族蛋白B2(HMGB2)在真核细胞中的定位和移位情况.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到HMGB2编码序列.然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒命名为pcDNA3-HA-HMGB2,随后将其转染NIH 3T3细胞.荧光显微镜观察仅转染质粒的细胞和质粒转染与亚砷酸钠刺激30min和1h后细胞内HA-HMGB2融合蛋白的定位及移位情况.结果 重组质粒经酶切、聚合酶链反应(FCR)和测序鉴定证明构建正确,并在NIH 3T3细胞中得到大量表达.荧光显微镜观察发现,FIA-HMGP2蛋白主要分布于细胞核中,经亚砷酸钠刺激后30min,部分细胞中的蛋白从胞核移位到胞质,刺激1h后蛋白则主要分布于胞质中.结论 成功构建带HA标签的HMGB2真核表达载体.该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位、移位,为下一步深入研究HMGB2作用细胞的信号通路提供了一个重要工具.