猪Ⅱ型圆环病毒ORF2与猪GM-CSF基因重组腺病毒共表达及免疫效果分析

• 作者: 刘忠华 李文平 陈降华
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪Ⅱ型圆环病毒ORF2 pGM-CSF 重组腺病毒 共表达 免疫效果
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 124-128
• 页数: 5页
• 分类号: S8
• 字数: 4217字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建含融合基因pGMCSF-ORF2的重组腺病毒,并对其表达水平和免疫效果进行分析.运用PCR方法扩增PCV2 ORF2和pGM-CSF基因,拼接后克隆入pMD18-T载体,然后再亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后电转化含腺病毒基因组(AdEasy-1)的大肠杆菌细胞BJ5183-Ad-1,成功获得了重组腺病毒DNA.将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD293细胞,经过病毒基因组的PCR和转录水平的RT-PCR及Western blot等方面对融合蛋白的表达进行了鉴定.以该病毒免疫Babl/c小白鼠,对免疫小鼠血清中PCV2抗体进行检测.结果显示,获得了pGMCSF-ORF2重组基因,重组腺病毒载体构建成功,获得了表达pGMCSF-ORF2融合蛋白的重组腺病毒.该病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中检测到了PCV2的特异性抗体.获得的重组腺病毒能有效表达pGMCSF-ORF2融合蛋白,且可诱导小鼠产生针对PCV2的特异性抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李文平	湖南农业大学动物医学院	111	731	15.0	20.0
2	刘忠华	湖南农业大学动物医学院	5	23	4.0	4.0
3	陈降华	湖南农业大学动物医学院	4	34	3.0	4.0