调节破骨细胞分化的RANK特异性基序的再确认

• 作者: 张祥忠 李娟 李庆山 杨茂华 罗绍凯 苏畅 许多荣 邹外一 黄珊
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NF-κB受体激动剂 破骨细胞
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 764-769
• 页数: 6页
• 分类号: R363.2
• 字数: 4518字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2009.04.028

摘要

目的: 进一步确认核转录因子NF-κB受体激动剂(RANK)蛋白中调节破骨细胞(OC)分化的特异性基序(motif),为阐明OC分化机制提供理论依据.方法: 分别突变RANK蛋白膜内部分第533-540之间的8个氨基酸(突变前氨基酸序列为DIIVVYVS,突变后氨基酸序列为ELLAAFAA),用定点突变方法构建8个由肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)和RANK跨膜部分和膜内部分共同组成的TNFR1/RANK突变嵌合体(TNFR1/RANK-533-TNFR1/RANK-540),每1个突变体在其RANK膜内部分含1个突变氨基酸.用包装细胞plat E分别将各突变体包装成逆转录病毒,通过逆转录病毒感染分别将这些突变体转染到TNFR1/TNFR2基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞(BMM)中.用TNF-ɑ和单核细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激、观察转染哪种突变体的BMM不能诱导OC形成,不能诱导OC形成的突变体所包含的突变前氨基酸就是RANK调节OC分化的关键氨基酸,多个关键氨基酸组成的片段就是RANK特异性motif.结果: 转染TNFR1/RANK-533、TNFR1/RANK-539和TNFR1/RANK-540的BMM均能分化成OC,表明氨基酸D533、V539、S540突变后对OC分化无影响;转染TNFR1/RANK-534的BMM有极少数能分化成OC,表明氨基酸I534突变后对OC分化有部分影响;而转染TNFR1/RANK-535、TNFR1/RANK-536、TNFR1/RANK-537和TNFR1/RANK-538的BMM均不能分化成OC,表明氨基酸I535、V536 、V537和Y538突变后对OC分化起关键影响.结论: I534、I535、V536 、V537和Y538这5个氨基酸组成的片段(534-IIVVY-538)可能就是RANK调节OC分化的特异性motif.