pEGFP-Survivin对GBC-SD细胞生长的抑制及对化疗敏感性的影响

• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胆囊癌 Survivin 短发夹环RNA 化疗
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 胆道外科
• 页码范围: 1600-1602
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3228字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2009.12.007

摘要

目的 观察重组质粒pEGFP-Survivin对胆囊癌细胞(GBC-SD)化疗敏感性的影响.方法 以噻唑蓝(MTT)比色法检测GBC-SD、GBC-SD/EGFP和GBC-SD/Survivin 3种细胞的增殖活性;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot测各组细胞中Survivin mRNA和蛋白质水平的表达;以合适浓度的顺铂(DDP,3.0 ms/L)作用相同的时间后,用MTY法检测3种细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡,并用MIT法筛选IC_(50)值,TUNEL法观察细胞核改变;另外检测DDP作用后各组细胞的Caspase-3蛋白酶活性的变化.结果 GBC-SD和GBC-SD/EGFP细胞的增殖活性大致相同,而GBC-SD/Survivin细胞的增殖活性明显下降;RT-PCR和Western blot均发现GBC-SD/Survivin细胞中的Survivin表达水平较其余两种细胞明显下降(分别下降了74.7%和71.5%);在给予了DDP作用后,GBC-SD/Survivin细胞存活率和IC_(50)[(2.03±0.24)ms/L]明显较低,细胞凋亡率较高(84.3%),而3种细胞用TUNEL法染色后均可见棕色凋亡细胞核.给予了DDP作用后,各组细胞Caspase-3活性均呈现先升高后下降的趋势,但GBC-SD/Survivin细胞中Caspase-3的活性明显高于另外两种细胞.结论 pEGFP-Survivin表达的Survivin shRNA能明显降低GBC-sD细胞中Survivin的表达,提高对化疗药物的敏感性.