BALB/c小鼠精原干细胞长期培养和移植的实验研究

• 作者: 廖文彪 张茨 杜贤进 杨嗣星 熊云鹤 王玲珑 申复进
• 来源期刊: 中华泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 精原细胞 干细胞 细胞培养技术 移植 小鼠
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 552-555
• 页数: 4页
• 分类号: R6
• 字数: 2457字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6702.2009.08.017

摘要

目的 建立小鼠精原干细胞(SSC)长期培养体系,探讨SSC体外增殖分化的关键因子.方法 收集出生4～6 d BALB/c绿色荧光小鼠睾丸,采用改良两步消化法获得细胞悬液,3次差速贴壁去除体细胞获得富集的精原细胞,采用添加生长因子的无血清基础培养液重悬,种植到小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养.基础培养液为StemPro-34 SFM干细胞培养基并补充15种添加成分;生长因子为10 ng/ml碱性成纤维细胞因子、20 ng/ml胶质细胞源性神经营养因子和200 ng/mlGDNF家族受体a1.取4～5周龄BALB/c雄性小鼠15只,腹腔注射40 mg/kg的白消安建立受体模型,采用三维显微注射系统将培养的SSC移植到受体左侧睾丸精曲小管内,右侧睾丸作为自身对照;分别采用体视荧光显微镜观察和HE染色检测细胞移植后睾丸生精功能恢复情况.结果 改良消化富集法消化后细胞活性>98%,SSC富集约18.5倍.饲养层培养1～2 d后细胞成对称或线形排列,细胞间可见明显的胞质桥连接.3～4 d后精原细胞增殖形成典型的克隆,为边缘不清楚的团块;小鼠SSC能在该培养体系中稳定培养、传代3个月.移植后2个月,体视荧光显微镜下受体睾丸内可见明显绿色阳性克隆,HE染色证实移植的SSC在受体睾丸内克隆增殖并分化产生成熟的精子.结论 成功建立了BALB/c小鼠SSC培养体系,为研究SSC增殖分化调控机制及SSC移植治疗男性不育提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玲珑	武汉大学人民医院泌尿外科	115	766	15.0	22.0
2	杨嗣星	武汉大学人民医院泌尿外科	139	934	16.0	23.0
3	杜贤进	武汉大学人民医院泌尿外科	41	184	8.0	11.0
4	张茨	武汉大学人民医院泌尿外科	67	286	8.0	13.0
5	申复进	武汉大学人民医院妇产科	30	141	7.0	10.0
6	熊云鹤	武汉大学人民医院泌尿外科	25	82	5.0	7.0
7	廖文彪	武汉大学人民医院泌尿外科	40	208	8.0	13.0