鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V基因的重组表达及酶特性

• 作者: 刘建华 孙亚伟 李胜利 潘玉善 胡功政 许兰菊 邓立新 陈红英
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡福氏志贺菌 超广谱β-内酰胺酶 SHV-12 TEM-1V
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 566-571
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 字数: 4821字
• 语种: 中文

摘要

通过PCR扩增获得鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V型ESBLs基因片段,定向克隆入质粒载体构建重组质粒,酶切和DNA测序鉴定后转化受体菌BL21,用SDS-PAGE电泳观察目的基因在重组菌中的表达,用双紫外分光光度仪测定表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶作用.结果表明,构建的重组质粒经EcoRⅠ和XholⅠ双酶切后,可切下目的条带;DNA测序发现插入片段与SHV-12和TEM-1V ESBLs基因序列完全一致.重组质柱转化BL21所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性.重组菌S-BL21、T-BL21的最优表迭条件分别是IPTG浓度0.5、0.8 mmol/L,诱导温度37℃、37℃,诱导时间5、4 h.SHV-12和TEM-1V型ESBLs能水解青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、头孢噻呋、头孢曲松和头孢噻肟;对头孢噻呋钠的Km值最小,分别为4.9和1.29;对头孢曲松钠的Km值最大,分别为53.43和24.13;抑制剂舒巴坦钠、它唑巴坦钠对SHV-12和TEM-1V型ESBLs水解抗生素有不同程度的抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘玉善	河南农业大学牧医工程学院	77	422	12.0	16.0
2	胡功政	河南农业大学牧医工程学院	150	1300	20.0	29.0
3	陈红英	河南农业大学牧医工程学院	168	646	12.0	16.0
4	许兰菊	河南农业大学牧医工程学院	60	445	12.0	19.0
5	邓立新	河南农业大学牧医工程学院	110	344	11.0	15.0
6	刘建华	河南农业大学牧医工程学院	92	705	14.0	22.0
7	孙亚伟	河南农业大学牧医工程学院	5	14	2.0	3.0