猪干扰素α在昆虫细胞中分泌表达及其抗病毒活性检测

• 作者: 崔保安 张红英 王亚宾 王彦彬 陈红英 魏战勇
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 干扰素 杆状病毒 昆虫细胞 表达 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 1435-1441
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 字数: 5395字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.038

摘要

[目的]为获得重组猪干扰素α.[方法]本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪干扰素α基因插入供体质粒pFastBac I多克隆位点,置于pH启动子控制下,昆虫可识别的蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,HBM)取代猪干扰素α原有信号肽以实现分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化.将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.[结果]重组蛋白通过间接免疫荧光、Western-blot证明重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中获得分泌表达.通过在猪肾细胞(pK-15)上抑制水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性,结果表明:昆虫细胞上清的抗病毒效价达到1.07×105 U-ml-1,昆虫细胞裂解液的抗病毒效价为3.15×104 U·ml-1.[结论]应用蜂素信号肽实现猪干扰素α在昆虫细胞上分泌表达,为临床上防治猪病毒性疫病奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈红英	河南农业大学牧医工程学院河南省动物性食品安全重点实验室	168	646	12.0	16.0
2	崔保安	河南农业大学牧医工程学院河南省动物性食品安全重点实验室	274	2313	25.0	33.0
3	王亚宾	河南农业大学牧医工程学院河南省动物性食品安全重点实验室	92	621	14.0	21.0
4	张红英	河南农业大学牧医工程学院河南省动物性食品安全重点实验室	125	1140	19.0	29.0
5	王彦彬	河南农业大学牧医工程学院河南省动物性食品安全重点实验室	40	281	9.0	15.0