山羊精子介导法转染外源基因影响因素及最适条件的研究

• 作者: 孙新明 江嘉陵 邱效武 魏泓
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 精子介导基因转染 最适转染条件 山羊
• 年，卷（期）: 2009,（z1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 310-314,330
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 5091字
• 语种: 中文

摘要

探讨山羊精子与外源DNA共孵育转染外源DNA效率的影响因素,优化精子转染程序.用DIG免疫组化方法检测和比较精子转染效率,因素为精子洗涤程度、转染缓冲液、精予活力、BSA、肝素、异种动物精浆等.离心洗涤3次以内的山羊精子DNase Ⅰ消化前、后阳性率随洗涤次数增加而显著增加(P＜0.05),而离心3次以上的转染效率略有下降;以mDM为共孵育缓冲体系可获得较高的转染效率;活力为0.55的精子转基因阳性率显著低于活力为0.9的精子(消化前、后阳性率分别为35.4±2.9%和21.8±5.3% vs 63.5±7.2%和50.3±2.8%,P＜0.os);共孵育体系中异种动物精浆可显著降低转染效率(P＜0.01),甚至与肝素可置换出已结合和内化转运到精子内的外源DNA,而共孵育体系中的BSA可抑制精子内化外源DNA.山羊共孵育法转染外源基因最适转染条件为mDM缓冲液洗涤3次后上浮收集高活力精子进行转染.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏泓	第三军医大学基础部实验动物学教研室	242	2753	27.0	38.0
2	孙新明	井冈山大学医学院	15	38	4.0	5.0
3	江嘉陵	井冈山大学医学院	6	11	2.0	3.0
4	邱效武	井冈山大学医学院	4	2	1.0	1.0