猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达

• 作者: 伍锐 余爱冬 刘泽文 唐文娟 徐涤平 杨克礼 梁望旺 段正赢 熊忠良 邓均华
• 来源期刊: 湖北农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 囊膜糖蛋白(GP5) 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 1048-1050,1141
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65+9.4|Q51|Q503
• 字数: 2679字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0439-8114.2009.05.008

摘要

采用RT-PCR方法扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒临床分离株(HBKM2)的ORF5全基因,并进行了测序分析,根据0RF5的结构特点,进一步扩增了截去N端信号肽序列的ORF5(nsORF5),并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体,构建了重组质粒pKG-ns5,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的nsORF5基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-nsGP5分子量约为43kD,并具有反应活性,这为进一步研究PRRSV GP5蛋白的功能及新型疫苗、血清学诊断方法的研制奠定了基础.