一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达

• 作者: 刘鑫 吴凯峰 崔亚利 庞丹 张薇薇 张雪梅 王虹 胥文春
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎链球菌 溶血素 重叠PCR 突变体
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 395-400
• 分类号: R378.1
• 字数: 4422字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.05.004

摘要

目的 使用重叠PCR方法构建构建△A146Ply突变体,原核可溶性表达△A146Ply蛋白,并明确其毒力变化情况;分析肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)在不同血清型肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae,SPN)中的表达情况.方法 以SPN D39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体ply基因所需引物;利用重叠PCR方法扩增合成△A146ply突变体.通过溶血实验分析其溶血活性,利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力,并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况.结果 突变体基因测序结果显示,Ply146位密码子GCT 3个碱基被缺失,△A146ply突变体构建成功,并实现了△A146Ply的可溶性表达,得到纯度＞90 %的重组蛋白.△A146Ply蛋白浓度为100 000 ng/ml亦未表现出溶血活性.△A146Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性.Western印迹结果显示,△A146Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应.结论 △A146Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子,可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体.