流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达

• 作者: 于在江 唐启慧 张烨 李梓 舒跃龙 辛丽 陈永坤 陈清轩 陈禹宝
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 农学
• 关键词: 流感病毒H3N2 血凝素 神经氨酸酶 酵母菌 表达
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 6-10
• 分类号: S852.65
• 字数: 4217字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-6179.2010.04.002

摘要

目的 克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法 在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(52 bp～1549 bp)、pMET A/NA(121 bp～1 260 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法 检测其抗原性.结果 重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELlsA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定了基础.