大鼠BMP-7重组腺病毒构建及在肾小管上皮细胞中表达

• 作者: 徐再春 朱芸芸 杨肃文 王伟
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白质类/遗传学 重组 遗传 转染 遗传载体 腺病毒科/遗传学 肾小管/细胞学 上皮细胞/代谢 肾硬化症/治疗
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 71-78
• 页数: 8页
• 分类号: R692
• 字数: 5764字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2010.01.012

摘要

目的:利用AdEasy~(TM) system构建携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒,并鉴定其在原代肾小管上皮细胞中的表达.方法:将BMP-7全长序列分为46个片段分段合成,再采用PCR方法将合成的46个寡核苷酸片段拼接成BMP-7基因,并克隆到测序载体中测序鉴定.经Not I和Hind Ⅲ双酶切后接入pShuttle-CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-BMP-7.EcoRI酶切重组pShuttle-BMP-7,与pAdEasy~(TM)DNA电穿孔共转化BJ5183感受态菌, 抽提重组AdBMP-7质粒,PacI酶切线性化重组质粒AdBMP-7后,转染Ad293细胞进行病毒包装和扩增,腺病毒荧光检测试剂盒测定其滴度.用AdBMP-7感染大鼠肾小管上皮细胞,以ELISA法和Western-blot法检测BMP(-7)在大鼠肾小管上皮细胞中的表达.RT-PCR方法检测α-SMA mRNA的表达水平,以鉴定重组腺病毒AdBMP-7的生物学活性.结果:构建了BMP-7基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度重组腺病毒保存液.该重组腺病毒在体外能有效转染大鼠肾小管上皮细胞并高表达BMP-7蛋白,所表达的BMP-7蛋白能有效逆转由TGF-β1诱导的α-SMA表达增高.结论:成功地构建了携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒,并初步证实其具有一定的抗肾纤维化功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱芸芸		12	45	4.0	6.0
2	徐再春		28	132	7.0	11.0
3	王伟		41	162	8.0	10.0
4	杨肃文	浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科	17	54	4.0	6.0