K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响

• 作者: 李景南 李潇 杨红 路新卿 钱家鸣
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: K-ras基因 突变 E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体 RhoA蛋白 结肠癌 转移
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 46-50,后插3
• 页数: 6页
• 分类号: R73.37
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2010.01.012

摘要

目的 观察K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响,探讨其促进结肠癌转移的相关机制.方法将培养的结肠癌细胞株Caco-2分别给予空白质粒phr-GFP转染(对照组)、K-ras基因突变型质粒phr-K-ras(Vail2)转染(转染组)、phr-K-ras(Val12)质粒转染+丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径特异性抑制剂PD98059处理(MAPK抑制组)和phr-K-ras(Val12)质粒转染+磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)途径特异性抑制剂LY294002处理(PI-3K抑制组),Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率,细胞免疫荧光检测E-cadherin、β-catenin蛋白表达及其在细胞内定位,Western blot检测细胞内p120蛋白的表达,免疫沉淀检测与E-cadherin结合的β-catenin蛋白水平,Pull-down实验检测RhoA蛋白活性.结果 转染组Caco-2细胞的迁移率为(19.8±5.6)%,明显高于对照组的(14.0±4.2)%(P=0.001)和MAPK抑制组的(15.8±1.2)%(P=0.044),但与PI-3K抑制组的(17.5±2.8)%差异无统计学意义(P=0.095).细胞免疫荧光检测结果显示,转染组细胞膜上的E-cadherin和β-catenin蛋白表达减少.Western blot检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内p120总蛋白表达减少.免疫沉淀检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内与E-eadherin结合的β-catenin蛋白水平下降.Pull-down实验检测结果显示,转染组细胞内的RhoA蛋白活性增加.结论 K-ras基因突变可以促进结肠癌细胞株Caco-2的转移,其可能是通过MAPK途径减少E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成,增强RhoA蛋白活性来实现的.