5-HT_(1A)受体蛋白在PC12细胞膜转运的动态变化

• 作者: 吕琼 张进禄 徐志卿 赵春礼 金艳燕 闫竹青 高尔静
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 5-羟色胺1A受体(5-HT_(1A)) G蛋白偶联受体(GPCRs) 绿色荧光蛋白(GFP) PC12细胞 光漂白荧光恢复技术(FRAP)
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 487-491
• 分类号: R338
• 字数: 2869字
• 语种: 中文

摘要

目的 在神经元样PC12活细胞上进行实时、可视和定量研究5-羟色胺1A受体的时空分布、膜转运和信号传导机制.方法 运用RT-PCR方法获得小鼠5-HT_(1A)基因,并插入到pEGFP-N1真核表达载体中.采用阳离子脂质体方法将质粒转染至PC12细胞和HEK293细胞中,通过G418筛选出稳定表达5-HT_(1A)-EGFP的PC12细胞系.运用激光共聚焦成像系统观察活细胞中5-HT_(1A)-EGFP的表达情况,利用光漂白荧光恢复(FRAP)技术在PC12细胞膜局部漂白后观察5-HT_(1A)-EGFP荧光蛋门在细胞膜上转运的情况.结果 克降所获得的小鼠5-HT_(1A)基因是准确的.5-HT_(1A)-EGFP蛋白清晰的分布于PC12和HKF293细胞膜上.通过FRAP技术观察到漂白区域的细胞膜在100 s内有部分恢复,说明受体在细胞膜上发生转运.结论 建立了稳定表达5-HT_(1A)-EGFP融合蛋白的PC12细胞系,并利用活细胞成像和FRAP技术观察分析并证实了5-HT_(1A)受体在PC12细胞的膜表面的表达和转运的动态变化.