奶山羊胎儿成纤维细胞的分离培养及脂质体法转染研究

• 作者: 万永杰 孟立 宋辉 庞训胜 张艳丽 王子玉 王锋 许丹
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 胎儿成纤维细胞 分离培养 脂质体 转染 奶山羊
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 页码范围: 81-86
• 分类号: Q2-33
• 字数: 5190字
• 语种: 中文

摘要

为获得转基因克隆羊的供体细胞,本试验采用组织块培养法结合胰蛋白酶消化法分离纯化得到奶山羊胎儿成纤维细胞(gFFs),绘制了生长曲线,鉴定了胎儿细胞性别及核型特征,并且研究了脂质体量、质粒量和转染时间对gFFs的绿色荧光蛋白(GFP)转染效率的影响.结果表明:该培养体系可以支持奶山羊胎儿成纤维细胞的体外生长,其细胞形态为梭形,高度汇合后呈火焰状,增殖特性以及核型特征均为正常,性别鉴定显示该奶山羊胎儿细胞为雌性,符合体细胞转基因克隆的基本要求.24孔板中采用脂质体转染试剂4.0 μL、质粒DNA 1.2μg,转染6 h可以获得最佳的转染效果,转染效率达4.21%.