抗草鱼出血病病毒转基因稀有(鮈)鲫的初步研究

• 作者: 廖兰杰 廖莎 朱作言 杜富宽 汪亚平 陈芸
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 小发夹RNA 草鱼出血病病毒 转基因鱼
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 837-842
• 分类号: Q786
• 字数: 4157字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1035.2010.00837

摘要

研究采用草鱼H1基因启动子,以草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)外衣壳蛋白VP7基因为靶基因,以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,构建了3个小发卡RNA(shRNA)表达载体pHlsiGCRV(x)-CMVeGFP.CIK细胞感染实验表明,pHIsiGCRV2-CMVeGFP具有较高的病毒抑制作用.通过显微注射将pH1siGCRV2-CMVeGFP导入稀有(鮈)鲫(Gobiocypris rarus)受精卵,获得转基因稀有(鮈)鲫P0代群体.转基因稀有(鮈)鲫攻毒实验显示,转基因稀有(鮈)鲫死亡率为30%,抗草鱼出血病能力显著提高.进一步的实时荧光定量PCR检测证实,转基因稀有(鮈)鲫脾脏、后肠和肝脏中GCRV的含量显著低于对照鱼,并随着时间的延续逐渐减少,转基因稀有(鮈)鲫体内GCRV的复制受到有效抑制.研究为抗草鱼出血病转基因鱼育种奠定重要基础.