牦牛铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建及其表达研究

• 作者: 徐亚欧 毛亮 毛德才 袁忠 郑玉才
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牦牛 Cu,Zn-S0D 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（23）
• 页码范围: 4928-4935
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.23.019

摘要

[目的]为解决医用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)来源的限制,利用基因工程方法构建牦牛Cu,Zn-SOD原核表达系统,为重组牦牛Cu,Zn-SOD作为注射用药奠定基础.[方法]RT-PCR扩增牦牛Cu,Zn-SOD编码基因,构建Cu,Zn-SOD/pET22b(+)重组表达载体,并转化到E.coli BL21(DE3)宿主菌,经IPTG进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE、活性染色及邻苯三酚法进行检测,采用Brad Ford方法测定融合蛋白浓度.[结果]本试验成功获得了牦牛Cu,Zn-SOD cDNA,长456 bp,编码152个氨基酸.与普通牛SOD编码基因序列cDNA一致率为99.6%,氨基酸序列一致率为98.7%,表达产物分子质量约为32 kD.酶粗提取液比活约为35U·mg-1.重组蛋白浓度0.2772(mg·mL-1).[结论]本研究成功构建了牦牛Cu,Zn-SOD/pET22b(+)原核表达载体,表达量较高、稳定性强,重组表达产物具有较高生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑玉才	西南民族大学生命科学与技术学院	170	826	14.0	20.0
2	徐亚欧	西南民族大学生命科学与技术学院	94	354	9.0	13.0
3	毛德才	西南民族大学生命科学与技术学院	3	13	2.0	3.0
4	袁忠	西南民族大学生命科学与技术学院	1	3	1.0	1.0
5	毛亮	沪州医学院心肌电生理研究室	1	3	1.0	1.0