人脐带间充质干细胞的人转化生长因子β3基因稳定表达系统的构建

• 作者: 何运铺 唐世杰 江乐文 罗红敏 谢思田
• 来源期刊: 汕头大学医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 脐带 间充质干细胞 转化生长因子β3 基因转染
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 217-220,封3
• 分类号: R318
• 字数: 3102字
• 语种: 中文

摘要

目的:探讨构建人脐带间充质干细胞(huMSCs)的人转化生长因子(hTGF)β3基因稳定表达系统的可行性,为进一步探讨创面治疗的研究打下基础.方法:用组织贴壁法原代培养huMSCs,流式细胞术(FCM)鉴定细胞表而抗原CD29、34、44、45和80,用脂质体介导的转染技术将人pcDNA3.1(-)/TGF-β3重组质粒转染进入huMSCs,并用G418进行筛选得到单克隆细胞,扩增后得到稳定表达人TGF-β3细胞株,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学技术检测转染前、后及筛选前、后细胞内TGF-β3基因表达,再次采用FCM检测细胞表而抗原表达变化,最后Western blot检测稳定表达组及未转染huMSCs的TGF-β3蛋白表达.结果:原代培养的HuMSCs中约70%的细胞表达表面抗原CD29、44,而绝大部分不表达CD34、45和80,原代培养的细胞符合huMSCs特性.免疫细胞化学染色显示瞬时转染率为(10.0±0.2)%,稳定转染率(85.0±0.7)%(P＜0.05),RT-PCR、Western blot显示转染并通过G418筛选的huMSCs高表达hTGF-f13,转染hTGF-β3基因的huMSCs其表面抗原与未转染前保持一致.结论:HuMSCs的hTGF-β3基因稳定表达系统构建成功,转染hTGF-β3基因的huMSCs体外培养条件下仍保持干细胞特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐世杰	汕头大学医学院第二附属医院烧伤整形外科	57	185	7.0	10.0
2	谢思田	汕头大学医学院第二附属医院烧伤整形外科	22	46	4.0	5.0
3	何运铺	汕头大学医学院第二附属医院烧伤整形外科	5	3	1.0	1.0
4	罗红敏	汕头大学医学院第二附属医院烧伤整形外科	2	0	0.0	0.0