鸭β-防御素9(AvBD9)单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 刘晓丽 刘胜旺 李子瑞 邵昱昊 韩宗玺 马得莹
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭 pGEX-duck AvBD9 pET-32a-duck AvBD9 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 研究资源
• 页码范围: 1203-1207
• 分类号: S8
• 字数: 3555字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.06.026

摘要

本研究旨在制备抗鸭β-防御素9(AvBD9)蛋白的单克隆抗体.首先用pGEX-6p-1载体表达的鸭AvBD9蛋白做抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠(Mus musculus),免疫3次,每次间隔15 d,融合前3 d加强免疫1次.然后将鸭AvBD9基因亚克隆到原核表达载体pET-32a的EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切位点上,构建重组表达质粒pET-32a-duckAvBD9,将重组质粒转化至大肠杆菌(Escheriohia coli)BL21(JM83-)株,经IPTG诱导表达、镍柱纯化后做检测原.用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot相结合的方法进行筛选及鉴定,经3次亚克隆后得到1株单抗,命名为1F11.结果表明:重组pET-32a-duckAvBD9蛋白大小为26kD,与预期大小一致,并能被抗pGEX-duck AvBD9阳性血清识别.单抗1F11在pGEX-6p-1空载体蛋白、pGEX-duck AvBD9蛋白、pGEX-duck AvBD10蛋白、pGEX-chicken AvBD10蛋白中能够特异性识别pGEX-duckAvBD9蛋白.其亚类鉴定重链为IgG1,轻链为κ链.本研究获得了1株鸭AvBD9蛋白的单克隆抗体,单抗1F11的特异性良好,可用于对鸭AvBD9蛋白的生物学功能及活性作进一步研究.