山羊卵巢颗粒细胞差异表达基因消减文库的建立

• 作者: 吴勇聪 孟立 应诗家 庞训胜 张艳丽 王子玉 王锋 闫益波
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 卵巢 颗粒细胞 基因表达 消减文库
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 95-100
• 分类号: S814.8|S826
• 字数: 4412字
• 语种: 中文

摘要

为了从单卵泡水平建立非闭锁大小卵泡颗粒细胞基因表达的消减文库,选择繁殖性能正常、空怀高繁殖力黄淮山羊2只,以氯前列烯醇处理40 h后取卵巢,计数卵泡并测量卵泡直径,钝性分离采集卵泡颗粒细胞,置于液氮内保存,取样后的卵泡部分组织采用原位缺口末端标记法(TUNEL)进行闭锁鉴定.选择直径6和4 mm非闭锁卵泡,提取颗粒细胞mRNA,扩增cDNA,监测抑制消减杂交及其文库构建的试验环节.结果表明:消减文库的阳性克隆测序成功率100%,从正向文库中随机挑取96个克隆进行差异表达的筛选,发现12个全新表达序列标签;应用RT-PCR对已知序列的抑制素βA亚基基因(INHBA)和谷胱甘肽S-转移酶Al基因(GSTA1)进行表达水平测定,证实了颗粒细胞2个基因mRNA的表达模式与差异显示的结果相同.表明消减文库构建成功.