生长相关蛋白GAP-43多肽抗体的制备

• 作者: 姬志娟 孟祥宏 张旭 张景艳 王蓉 盛树力 赵志炜
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 生长相关蛋白-43 多肽合成 抗体制备
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 22-25,后插2
• 分类号: R2392-33
• 字数: 3343字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2010.08.006

摘要

目的 对生长相关蛋白43(growth associated proteins-43,GAP-43)进行抗原表位分析并制备兔多克隆抗体.方法 通过对GAP-43 cDNA序列及氨基酸序列的结构进行生物信息分析,依据蛋白质的二级结构、亲水性、疏水性、抗原性及理化特性,经过同源性检索后,综合考虑抗体设计的其他因素,选出具有免疫活性的抗原决定簇多肽片段,采用有机固相多肽合成法合成了GAP-43的多肽片段,并与载体蛋白血蓝蛋白(KLH)偶联制备成抗原,免疫新西兰家兔.结果 ELISA测定GAP-43抗体效价为1:32 000;Western blot检测结果显示:在分子量25kDa出现单一条带;免疫组织化学法检测显示:GAP-43蛋白在小鼠海马神经元中有表达;免疫细胞化学法检测显示:GAP-43蛋白在人神经母细胞瘤株SH-SY5Y中存在表达.结论 利用生物信息学软件比较准确地预测GAP-43的抗原决定簇,并成功制备了高效价、高特异性的多肽抗体.