COL1A1-shRNA表达载体的构建及对胃癌细胞增殖迁移的影响

• 作者: 周天华 商燕 姒健敏 李爱清 甘丽红 郭磊
• 来源期刊: 浙江大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 胃肿瘤/病理学 胶原Ⅰ型/遗传学 RNA干扰 受体,CXCR4/遗传学 转录 遗传 遗传载体
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 257-263
• 分类号: R73-36
• 字数: 4809字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2010.03.008

摘要

目的:构建COL1A1特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价其对胃癌细胞BGC-823增殖迁移的影响.方法:根据文献获得3个COL1A1的siRNA靶序列,设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencerTM 4.1- CMV neo线性质粒载体连接,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选获得重组质粒;经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染胃癌BGC-823细胞,利用G418筛选稳定表达COL1A1-shRNA的BGC-823细胞株.通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后细胞COL1A1在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法及Transwell法检测COL1A1干扰后胃癌细胞增殖及迁移能力的变化.结果:序列测定表明成功构建3个COL1A1-shRNA表达载体.实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测显示,COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞的COL1A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);MTT试验及Transwell迁移试验显示,转染后细胞增殖及迁移能力明显降低(P<0.05).结论:COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞能有效抑制细胞COL1A1的表达及癌细胞的增殖迁移.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭磊	浙江大学医学院疾病模拟中心	20	337	11.0	18.0
2	姒健敏	浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室	108	1092	21.0	26.0
3	李爱清	浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室	4	9	2.0	3.0
4	周天华	浙江大学医学院疾病模拟中心	11	33	4.0	5.0
5	商燕	浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室	3	9	2.0	3.0
6	甘丽红	浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室	1	6	1.0	1.0