APE1shRNA重组质粒的构建及对人乳腺癌细胞生长的影响

• 作者: 佟仲生 史玉荣 多健 王忱
• 来源期刊: 实用肿瘤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 RNA,短发卡 脱嘌呤脱嘧啶核苷酸内切酶1 基因表达 逆转录聚合酶链反应 免疫印迹法
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 523-527
• 分类号: R737.9
• 语种: 中文

摘要

目的 设计构建靶向脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1(APE1/ref-1)特异性短发卡RNA的真核表达载体,并转染人乳腺癌T47D细胞. 方法 设计、合成针对APE1的特异性的短链寡核苷酸,构建APE1特异性shRNA的重组质粒,稳定转染人乳腺癌T47D细胞;采用聚合酶链反应和免疫印迹法检测转染前后T47D细胞中APE1 的表达.采用四甲基偶氮唑盐法观察T47D细胞的生长情况. 结果 经酶切和测序鉴定,成功构建APE1特异性shRNA的重组质粒,并能够转染T47D细胞.转染后,APE1在mRNA和蛋白水平表达分别下降约53.1%和60.5%,T47D细胞增殖活性受到抑制. 结论 运用pGenesil-1.1质粒载体构建的靶向APE1特异性shRNA的重组质粒可以成功转染T47D细胞,有效抑制APE1 的表达,并抑制肿瘤细胞的生长.