戊型肝炎病毒基因Ⅲ型病毒样颗粒的表达与抗原性分析

• 作者: 李天成 柯昌文 柳正 黄海燕
• 来源期刊: 华南预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,戊型 基因 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: R373.21
• 语种: 中文

摘要

目的 观察戊型肝炎病毒(HEV) 基因Ⅲ 型(GIII) ORF2 全长片段在昆虫细胞中的表达和病毒样颗粒(VLP) 的装配情况,对纯化的VLP 进行抗原性分析.方法 应用含Ⅲ 型HEV 全长ORF2的pVL 1393-GIII ORF2质粒,体外与杆状病毒同源重组后,转染昆虫细胞Sf 9细胞与在Tn 5细胞中表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和western blot 检测表达产物,超速离心法纯化,检测是否形成病毒样颗粒,用免疫电镜和ELISA 分析病毒样颗粒的抗原性.结果 Ⅲ 型ORF2 全长基因在Sf 9和Tn 5昆虫细胞中表达可获得72、64、58、56、53 kD的蛋白质,在Tn 5细胞中有56、53 kD的蛋白质分泌到培养液.纯化后可获得6.7 mg/mL的蛋白质,分子量为53 kD,电镜观察发现了直径约为25 nm的VLP ,浮密度为1.291 g/cm3.检测基因IV型戊肝感染病人血清,GIII VLP与G I VLP具有同样的灵敏度,均能检测到滴度分别为1: 204 800 和1: 102 400的IgM和IgG抗体.同时GIII VLP在戊肝病人血清和IgM阳性猪血清孵育发生凝集反应.结论 戊型肝炎病毒基因Ⅲ 型ORF2 全长基因片段可以在昆虫细胞表达系统高效表达.形成的VLP 具有HEV 病毒颗粒类似的抗原活性,可用于制备HEV抗体诊断试剂和开发预防用疫苗.