抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体的制备和鉴定

• 作者: 余传信 华万全 宋丽君 殷旭仁 王玠 许永良 钱春艳
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 14-3-3蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 437-441
• 分类号: R383.24
• 字数: 4418字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6661.2010.05.010

摘要

目的 制备抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体,并鉴定抗体性质.方法 以重组表达纯化的日本血吸虫信号蛋白14-3-3为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验及免疫印迹法对获得的单克隆抗体进行类和亚类、效价、浓度、纯度、亲和常数、特异性和检测灵敏度的测定与鉴定.结果 共获得6株针对日本血吸虫信号蛋白14-3-3的单克隆抗体,分别为5G9、3F1、3F7、5C6、5D1和1G6,抗体类型分别为IgG1、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG1和IgG1.对其中的单克隆抗体5G9分析显示,制备的腹水抗体效价为1:1.28×105,亲和层析纯化后的浓度为5.3 mg/ml,纯度＞95%,亲和常数为5.1×107mol/L.免疫印迹试验结果表明,该单克隆抗体可与体外重组表达纯化的日本血吸虫14-3-3蛋白特异性结合,同时也能与日本血吸虫可溶性虫卵抗原、成虫排泄分泌抗原和成虫抗原特异性反应,而与大肠埃希菌、健康人血清和华支睾吸虫抗原均无明显交叉反应.HRP标记的单克隆抗体5G9检测14-3-3蛋白的灵敏度为31.25 ng/ml.结论 本研究获得了6株能稳定分泌抗日本血吸虫14-3-3蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为建立新的日本血吸虫活动性感染检测方法奠定了良好的基础.