RNAi下调AKT1、PI3K P85表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

• 作者: 任玉 周旋 姚智 梅玫 王凡 祁艳斌 蒋伶活 赵津辉 高伟
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 乳腺肿瘤 AKT1 PI3K P85 增殖
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 51-56
• 页数: 6页
• 分类号: R737.9|R730.54
• 字数: 4086字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.01.010

摘要

目的:探讨RNAi(RNA interference)技术抑制乳腺癌MCF-7细胞中AKT1和PI3K P85亚基的表达对MCF-7细胞增殖和侵袭等的影响.方法:将包含AKT1、PI3K P85两种siRNA开放阅读框的短发夹RNA(shRNA)重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siAKT1-siPI3K转染至乳腺癌MCF-7细胞.应用real-time PCR和Western blotting检测转染后目的基因mRNA和蛋白的表达水平,并用Western blotting检测目的基因被沉默后PCNA、cyclin D1和P53的表达情况.应用MTT法、流式细胞术、2-D和3-D Matrigel实验检测MCF-7细胞转染前后的细胞增殖周期和侵袭能力.结果:重组腺病毒质粒表达载体rAd5-siAKT1-siPI3K介导的靶向AKT1, PI3K P85 shRNA可以有效抑制目的基因AKT1和PI3 Kp85的mRNA和蛋白表达;下游相关因子PCNA、cyclin D1的表达亦下调,P53表达则上调.MTT法结果显示rAd5-siAKT1-siPI3K组细胞生长抑制率>50%,与未转染组和rAd5-siCtrl转染组比较,出现明显的G_1/G_0细胞周期阻滞;2-D和3-D Matrigel实验显示,未转染组和rAd5-siCtrl转染组细胞呈正常形态,而rAd5-siAKT1-siPI3K 转染组细胞贴壁生长能力明显减低,细胞团块明显缩小.结论:靶向AKT1、PI3K P85亚基的shRNA技术可以抑制MCF-7细胞中AKT1、PI3K P85亚基的表达,抑制MCF-7细胞的体外增殖.