大肠杆菌菌蜕作为核酸疫苗载体的实验方法研究

• 作者: 季守平 李素波 檀英霞 王璇琳 王颖丽 靳小攀 高红伟
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌 菌蜕 疫苗 DNA RAW264.7 pDSred-N1
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 171-174,186
• 分类号: R979.9
• 字数: 6086字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.02.019

摘要

目的 制备大肠杆菌DH5α菌蜕,并用其装载核酸片段以及质粒DNA,体外转染抗原递呈细胞,探讨其作为DNA疫苗载体的可能性.方法 将构建有φX174噬菌体裂解蛋白的温控型表达质粒pHH43转化入大肠杆菌DH5α中,诱导细菌裂解制备大肠杆菌DH5α菌蜕,利用制备的DH5α菌蜕装载核酸片段,并摸索出较好的装载方法用于质粒DNA的装载,然后转染巨噬细胞RAW264.7,观察转染效果.结果 成功制备了大肠杆菌DH5α菌蜕,细菌的裂解效率可达97.8%,对核酸片段和质粒DNA的装载效率分别达94.89%和91.98%,装载红色荧光蛋白质粒pDSred-N1的DH5α菌蜕转染巨噬细胞RAW264.7,红色荧光蛋白的表达效率可达50%.结论 大肠杆菌DH5α菌蜕可以用于装载核酸疫苗并将其靶向性地导入到抗原递呈细胞中,可获得较高的表达效率,初步验证了大肠杆菌DH5α菌蜕作为核酸疫苗载体的可行性.