人类流感病毒多重PCR分型方法的建立

• 作者: 刘洪 康晓平 李永强 李辉 杨银辉 林方 熊伟 祝庆余
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 人类流感病毒 病毒分型 多重PCR
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 331-333,344
• 分类号: R373.13
• 字数: 3312字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.04.009

摘要

目的 建立一种可以同时检测人类A型流感病毒,B型流感病毒及A型流感病毒H1,H3,H5亚型的多重RT-PCR方法.方法 根据人类流感病毒的特异性基因设计并合成多对特异性引物,建立可同时扩增出人类流感病毒亚型特异性片段的多重PCR的方法.同时,对该方法的特异性和敏感性进行了评价,并利用该方法对39份疑似swine H1N1的临床标本进行检测.结果 该方法可同时扩增出A型流感病毒M基因203 bp,B型流感病毒M基因296 bp,A型流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为362 bp(H1),112 bp(H3),188 bp(H5),494 bp(swine H1).该实验最低可检测新甲型H1N1 (A/Beijing/501/2009)病毒RNA 0.5TCID50.该方法的特异性实验结果显示,在多重PCR检测中未检出非特异扩增的PCR产物.同时,使用该方法从39份疑似新甲型H1N1的临床咽拭子标本中检测出新甲型H1N1阳性的标本4份(10.2%),季节性H1N1亚型2份(5.1%),H3N2亚型12份30.7%,本次实验结果与WHO通过实时PCR方法检测的结果一致.结论 本研究建立的多重PT-PCR方法快速、敏感,特异性强,可用于人类流感病毒的分型检测.