禽流感病毒H1、H3亚型和M基因三重PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 郭捷
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 禽流感病毒 H1亚型 H3亚型 M基因 三重PCR
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1215-1219
• 页数: 5页
• 分类号: S854.44
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2013.7.1215

摘要

[目的]建立用于检测禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)且能同时区分H1和H3亚型AIV的方法,为有效防控禽流感(Avian influenza,AI)奠定基础.[方法]根据H1亚型、H3亚型AIV-HA基因和M基因的保守核苷酸序列,分别设计3对特异性引物,以含有H1亚型AIV和H3亚型AIV的cDNA为模板,对三重PCR扩增条件进行优化,验证其特异性和敏感性,并对临床样品进行AIV检测.[结果]H1和H3亚型AIV混合模板经三重PCR扩增可获得3条特异性条带,其中302 bp为H1亚型HA基因、453bp为M基因、626 bp为H3亚型HA基因；含有H1或H3亚型AIV的模板均出现两条特异性条带,大小分别为302和453bp、453和626 bp;含有其他亚型AIV的模板仅出现一条特异性条带(453bp)；而其他禽呼吸道疾病病毒均未扩增出任何条带.优化后的三重PCR最低能同时检测出7.00 pg的H1亚型AIV、3.62 pg的M基因和20.60 pg的H3亚型AIV;对100个临床样品进行AIV检测,AIV总阳性率为36％,其中H1亚型阳性率4％、H3亚型阳性率9％、其他亚型阳性率23％.[结论]禽流感病毒H1、H3亚型和M基因三重PCR检测方法具有快速、敏感、特异等特点,适用于AIV的检测及H1和H3亚型AIV的分型检测.