H7亚型禽流感病毒核酸标准品制备及双探针荧光RT-PCR检测研究

• 作者: 乔彩霞 张伟 张利峰 张鹤晓 汪琳 蒲静 谷强 高志强
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 禽流感病毒 H7亚型 标准品 荧光RT-PCR
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 13-15,18
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

从禽流感病毒A/Chieken/1/2002(H7N1)核酸中扩增了完整HA的基因编码序列,克隆测序后,采用体外转录方法制备eRNA.用RNA保存液稀释至含量约108Copies/μL.分装后进行均匀性和稳定性检验,通过8家实验室联合定值,取平均值作为定值结果;经统计分析计算了该标准品的不确定度.此外,采用TaqMan方法,根据禽流感病毒H7亚型的血凝素基因的末端,采用1对引物和2条MGB探针,建立了禽流感病毒H7亚型TaqMan荧光RT-PCR快速检测技术.应用建立的方法对研制的标准品进行检测,检测限可达10基因拷贝;对新城疫病毒及其他亚型的流感病毒核酸进行检测,结果表明,建立的方法特异性良好,而且双探针的设计思路更能保证病毒核酸的有效检测,防止漏检.