应用滚环扩增技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究

• 作者: 佘会元 刘红艳 张继明 李新艳 秦艳丽 翁心华 赵旭 邬祥惠
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 滚环扩增技术 DNA,环状
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 513-518
• 分类号: R5
• 字数: 4495字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2010.09.001

摘要

目的 应用滚环扩增(RCA)技术检测HBV共价闭合环状DNA(cccDNA),观察该方法的特异性和敏感性.方法 以HBV全基因质粒为模板,经酶切、连接、浓缩、胶回收纯化等步骤,构建和制备HBV cccDNA标准品.抽提7例慢性乙型肝炎患者肝组织总DNA,进行滚环扩增.用HBV cccDNA标准品、3.2 kb线性HBV DNA、健康肝组织总DNA及15例慢性乙型肝炎患者血清总DNA作为对照,验证此方法的特异性.将HBV cccDNA标准品进行系列稀释,了解该方法的敏感性.结果 成功构建了HBV cccDNA,并可用RCA方法进行扩增.RCA方法可从2 mg的慢性乙型肝炎患者肝组织中检测到HBV cccDNA,并可检测低至1×102拷贝/μL的HBV cccDNA.RCA方法不能检测3.2 kb线性HBV DNA,在健康肝组织及15例慢性乙型肝炎患者血清中亦检测不到HBV cccDNA.结论 RCA方法操作较方便,具有很高的特异性和敏感性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	翁心华	复旦大学附属华山医院感染科	185	1261	17.0	26.0
2	张继明	复旦大学附属华山医院感染科	63	322	9.0	15.0
3	佘会元	上海市第七人民医院感染科	20	128	6.0	11.0
4	邬祥惠	复旦大学附属华山医院感染科	32	201	8.0	13.0
5	李新艳	复旦大学附属华山医院感染科	10	28	4.0	5.0
6	赵旭	太原市第三人民医院重症肝病科	3	8	2.0	2.0
7	秦艳丽	复旦大学附属华山医院感染科	8	13	2.0	3.0
8	刘红艳	复旦大学附属华山医院感染科	1	6	1.0	1.0