靶向MUC1的siRNA表达载体的构建及鉴定

• 作者: 吴金术 李振振 李灼日 李诤
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胆管肿瘤 RNA干扰 黏蛋白类
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 155-158
• 页数: 4页
• 分类号: R735.8
• 语种: 中文

摘要

目的 构建和鉴定针对黏蛋白1(MUC1)特异性的siRNA表达载体.方法 人工合成一对互补并编码相应短发夹状MUG1-siRNA的寡核苷酸链,将其插入pGC sileneer~(TM) U6/Neo/RNAi质粒载体中,用双酶切、阳性克隆聚合酶链反应(PER)鉴定及DNA测序鉴定所构建的重组载体是否正确;以脂质体法将构建的重组载体导入人胆管癌细胞QBC939中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)分别检测转染细胞中MUC1 mRNA和蛋白的表达.结果双酶切、PER鉴定及DNA测序证实MUC1-siRNA真核表达载体构建成功,转染该载体后的QBC939(干扰组)中MUC1 mRNA 及其蛋白质表达水平明显下调(P<0.05).结论 成功构建的特异性siRNA表达载体,转染QBC939后可特异性地封闭MUC1的表达,为进一步研究MUC1-siRNA载体提供了实验基础.