山羊痘DNA疫苗pVAX1-P32的构建及其安全性评估

• 作者: 周碧君 文明 朱时杰 李霞云 杨颖 樊翠华 殷俊磊
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊痘病毒 P32基因 DNA疫苗 真核表达载体 安全性
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 1052-1056
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文

摘要

为了构建山羊痘病毒(GPV)P32基因真核表达质粒pVAX1-P32,探讨pVAX1-P32重组表达质粒作为DNA疫苗在小鼠体内的组织分布和生物安全性.以pMD18-T-P32/LD为模板,通过PCR扩增GPV P32基因片段,并定向插入真核表达载体pVAX1中,构建重组表达质粒pVAX1-P32,将其转入大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆进行双酶切与PCR鉴定.大量提取纯化重组质粒pVAX1-P32,经肌肉注射免疫小鼠,于免疫后不同时间剖杀小鼠,分别采集心肌、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、腿肌、血液等组织样品,抽提总DNA,利用PCR分析pVAX1-P32在小鼠组织内的动态分布及其与宿主细胞染色体的整合情况;同时,以PCR技术检测免疫小鼠粪便,分析pVAX1-P32重组表达质粒在外界环境中的释放情况.结果表明,真核表达重组质粒pVAX1-P32的双酶切鉴定及PCR扩增结果与预期结果相符;肌肉注射小鼠后,pVAX1-P32迅速分布到小鼠其他组织器官中,同时,未发现pVAX1-P32与宿主细胞染色体有整合现象;粪便中也均未检测到目的基因.表明,成功构建了真核表达重组质粒pVAX1-P32,且其作为疫苗对动物和环境是安全的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周碧君		218	1054	13.0	22.0
2	文明		219	646	10.0	14.0
3	杨颖		15	34	3.0	5.0
4	殷俊磊		13	49	4.0	6.0
5	李霞云		4	3	1.0	1.0
6	樊翠华		3	11	2.0	3.0
7	朱时杰		5	7	1.0	2.0